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多标记病理切片染色解决方案:Opal/TSA

多标记病理切片染色解决方案:Opal/TSA(酪酰胺信号放大)
   Opal是一套基于酪酰胺信号放大技术(TSA,Tyramide Signal Amplification)的多标记免疫组化染色方案,为组织样品特别是FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)样品进行染色,并且允许同一样本中使用同一种属来源的不同一抗进行多标记复合染色。配合多光谱成像分析系统,可以获得高信噪比(扣除背景自发荧光)的图像,甚至是多达7~10种标记的同步染色和共定位及定量分析。

Opal/TSA多标记染色解决了传统的免疫荧光标记技术所面临的大量挑战。
  Opal/TSA多标记免疫荧光 传统免疫荧光
靶点数目 不受限制(最多可同时染色7-10种) 一般标记3种(含DAPI),>3种标记难度较大
一抗种类 同一种属的不同抗体即可满足要求 不同种属的不同抗体
二抗种类 连接辣根过氧化物酶的同种属二抗 连接荧光探针的不同种属二抗
染色策略 任何样本无需任何染色策略,简单的重复前一步的染色过程,样本/靶点的差异不影响染色过程,使用简单方便 样本抗原的空间位置的差异,需要设计复杂的染色策略。样本/靶点的差异导致染色策略的差异,染色过程复杂、多变
染色效果 高染色分辨率和染色特异性,信号强度更强,更稳定,淬灭时间更长,无背景影响,各靶点的信噪比大大提高,尤其适合组织基于单细胞的定量分析 亮度较弱,容易淬灭,各种抗体间存在互相影响,背景较高,对基于单细胞的定量分析不利。
实验成本
  1. 同一种属的一抗和二抗,价格相对便宜。
  2. 简单的染色策略和无需任何重复的预实验,即可掌握整个染色技术,大大缩小了预实验的材料损耗。
  3. 一抗和二抗工作浓度更低,单次费用更低
  1. 不同种属的抗体价格存在差异,一般种属稀少的价格高。
  2. 不同种属的二抗,价格存在差异,一般稀少的种属价格高。
  3. 寻找合适的染色策略,复杂的多次重复的预实验大大的增加了实验成本
应用范围 二抗具备通用性,因此实验室中所有的研究领域均可使用 二抗不具备通用性,实验室中应用领域受到局限

Opal/TSA染色技术与传统技术的结果以及7种染色的结果:
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